Josie and the Pussycats è incentrato su una girlband pop formata da tre ragazze che durante le pause dei loro tour si imbattono in misteri e strane avventure. Le tre artiste sono la rossa cantante e chitarrista Josie, la tamburellista afroamericana Valerie e la bionda batterista Melody. Altri personaggi sono il loro codardo manager Alexander Cabot III, sua sorella Alexandra (che non sopporta Josie), il loro gatto Sebastian ed il loro muscoloso autista Alan M.